摘 要(yao)：目的：探(tan)討(tao)芍(shao)藥(yao)(yao)(yao)甘(gan)(gan)草(cao)(cao)(cao)附子(zi)湯(tang)(tang)對類(lei)風濕性(xing)關節炎的作(zuo)用機理。方法(fa)：48只Wistar大鼠隨機分為空白對照組(zu)(zu)(zu)、模型組(zu)(zu)(zu)、雷公藤多甙組(zu)(zu)(zu)、芍(shao)藥(yao)(yao)(yao)甘(gan)(gan)草(cao)(cao)(cao)附子(zi)湯(tang)(tang)組(zu)(zu)(zu)。除(chu)空白組(zu)(zu)(zu)外，各(ge)組(zu)(zu)(zu)大鼠復制類(lei)風濕關節炎模型，連(lian)續灌胃(wei)給藥(yao)(yao)(yao)21天，采(cai)血測定(ding)白介素-1β（IL-1β）、前列腺素E2（PGE2）水平，取(qu)左踝關節組(zu)(zu)(zu)織觀察病理改變(bian)。結(jie)果：芍(shao)藥(yao)(yao)(yao)甘(gan)(gan)草(cao)(cao)(cao)附子(zi)湯(tang)(tang)組(zu)(zu)(zu)血清中IL-1β、PGE2明(ming)顯(xian)(xian)降低，與模型組(zu)(zu)(zu)比較有顯(xian)(xian)著性(xing)差(cha)異。關節病理損(sun)害明(ming)顯(xian)(xian)改善(shan)。結(jie)論(lun)：芍(shao)藥(yao)(yao)(yao)甘(gan)(gan)草(cao)(cao)(cao)附子(zi)湯(tang)(tang)能(neng)夠降低IL-1β、PGE2含(han)量從而(er)減輕其(qi)對關節的侵害。
關(guan)鍵詞：芍藥(yao)甘草附子湯；類(lei)風濕性(xing)關(guan)節炎(yan)；IL-1β；PGE2
芍(shao)藥(yao)(yao)(yao)(yao)甘(gan)(gan)草(cao)(cao)附(fu)子(zi)(zi)(zi)湯(tang)出自《傷(shang)寒論(lun)》，見于68條“發汗，病(bing)不解(jie)，反惡寒者，虛故(gu)也，芍(shao)藥(yao)(yao)(yao)(yao)甘(gan)(gan)草(cao)(cao)附(fu)子(zi)(zi)(zi)湯(tang)主之。”由白芍(shao)、炙甘(gan)(gan)草(cao)(cao)、炮附(fu)子(zi)(zi)(zi)3味(wei)藥(yao)(yao)(yao)(yao)組成，其(qi)中(zhong)芍(shao)藥(yao)(yao)(yao)(yao)酸(suan)苦，養血(xue)斂(lian)陰(yin)(yin)，柔(rou)肝止(zhi)(zhi)痛；甘(gan)(gan)草(cao)(cao)甘(gan)(gan)溫，補中(zhong)緩急，止(zhi)(zhi)痛；二藥(yao)(yao)(yao)(yao)相合酸(suan)甘(gan)(gan)化陰(yin)(yin)，滋(zi)陰(yin)(yin)養血(xue)，緩急止(zhi)(zhi)痛；附(fu)子(zi)(zi)(zi)大辛大熱(re)，補火助陽，散寒止(zhi)(zhi)痛，與甘(gan)(gan)草(cao)(cao)相合辛甘(gan)(gan)化陽，附(fu)子(zi)(zi)(zi)性猛，得甘(gan)(gan)草(cao)(cao)而緩，芍(shao)藥(yao)(yao)(yao)(yao)性寒，得附(fu)子(zi)(zi)(zi)而和。且(qie)芍(shao)藥(yao)(yao)(yao)(yao)可破陰(yin)(yin)結(jie)，祛除經絡(luo)中(zhong)之瘀，甘(gan)(gan)草(cao)(cao)補中(zhong)堅(jian)筋骨，附(fu)子(zi)(zi)(zi)走(zou)而不守(shou)，通脈(mo)散寒。本方雖小，但用(yong)藥(yao)(yao)(yao)(yao)精煉，用(yong)治痹證(zheng)包含祛除病(bing)因，改善臨(lin)床癥狀等功能。并且(qie)毒副(fu)作用(yong)較小，易長期堅(jian)持(chi)服(fu)用(yong)。為(wei)探討該方的(de)作用(yong)機(ji)理，以其(qi)對(dui)弗氏完全佐劑(ji)關(guan)節炎(AA)大鼠的(de)免疫調節及關(guan)節病(bing)理形態的(de)影響為(wei)主要研究內容進(jin)行實驗觀察。
1實驗材料
1．1實驗動物
普通級健康Wistar大(da)鼠48只［遼(liao)寧中醫(yi)藥大(da)學動(dong)物(wu)實驗中心(xin)提供，許可證號：SYXY（遼(liao)）2003-0019］，雌雄各(ge)半，體重（180±20）g，隨機分為4組(zu)(zu)，即(ji)空白對照組(zu)(zu)（A組(zu)(zu)）、模(mo)型組(zu)(zu)（B組(zu)(zu)）、雷公(gong)藤多(duo)甙(dai)對照組(zu)(zu)（C組(zu)(zu)）、芍藥甘(gan)草附子湯組(zu)(zu)（D組(zu)(zu)），每組(zu)(zu)各(ge)12只。
1．2藥物
芍(shao)藥(yao)(yao)甘草(cao)附(fu)子湯，由白芍(shao)、炙(zhi)甘草(cao)、炮附(fu)子組成（藥(yao)(yao)材由遼寧中(zhong)醫(yi)藥(yao)(yao)大學(xue)附(fu)屬醫(yi)院中(zhong)藥(yao)(yao)房(fang)提供），大鼠用量(liang)(liang)按(an)文獻方(fang)法折(zhe)算(suan)。藥(yao)(yao)物經(jing)常規煎煮(zhu)、過濾(lv)、水浴蒸(zheng)發至每毫升含生藥(yao)(yao)材0.78g，置4℃冰箱保存備用。雷(lei)公(gong)藤多甙(江蘇美通制藥(yao)(yao)有限(xian)公(gong)司，國藥(yao)(yao)準字：Z32021007，批號：070115)，大鼠用量(liang)(liang)按(an)文獻方(fang)法折(zhe)算(suan)。用蒸(zheng)餾水稀釋至每毫升含原藥(yao)(yao)物0.001g備用。
1．3試劑
白(bai)細(xi)胞介(jie)素－1β（ELISA）試劑(ji)(ji)(ji)盒（上海西(xi)唐生物科技(ji)有限公(gong)司(si)） 。前列腺素E2(ELISA)試劑(ji)(ji)(ji)盒（北(bei)京北(bei)方偉(wei)業(ye)發(fa)展有限公(gong)司(si)）。弗氏(shi)完(wan)全(quan)佐劑(ji)(ji)(ji)試劑(ji)(ji)(ji)盒（北(bei)京欣(xin)惠澤奧(ao)科技(ji)有限公(gong)司(si)）。
1．4儀器
電熱恒溫水浴箱（HH.W21.Cr600,北京長安科學儀(yi)器(qi)廠(chang)）。飛(fei)鴿牌系列離心機（TDL-5-A）。
2實驗方法
2．1模型復制
將大鼠(shu)適應性喂養1周(zhou)，于B、C、D 3組(zu)大鼠(shu)每(mei)只右后足足墊常規消毒后皮內(nei)注射弗氏完全佐劑(ji)0.1mL，A組(zu)不造模。
2．2處理因素
造(zao)模第12天后，開始灌胃給(gei)藥，每日1次(ci)。C組(zu)給(gei)予(yu)芍(shao)藥甘草(cao)附(fu)子湯水煎液，按0.87mL/100g體(ti)重(zhong)給(gei)藥，A、B兩組(zu)分(fen)別給(gei)予(yu)等量無菌生理鹽水，D組(zu)給(gei)予(yu)雷(lei)公(gong)藤(teng)多甙水溶液，按1mL/100g體(ti)重(zhong)給(gei)藥。每周復查體(ti)重(zhong)，及時調(diao)整(zheng)藥量。
2．3取材
于給藥第(di)21天(tian)后(hou)，用烏拉坦對大鼠進(jin)(jin)行腹腔(qiang)(qiang)麻醉，切開腹腔(qiang)(qiang)，用5mL注射器進(jin)(jin)行腹主(zhu)動脈穿(chuan)刺(ci)，抽(chou)取動脈血約3～5mL，離心(xin)后(hou)，取上清液待測。取左后(hou)足踝(huai)關節(jie)浸泡于福爾馬林中固定備用。
2．4指標檢測
2．4．1形(xing)態學(xue)指(zhi)標(biao) 左后(hou)足(zu)踝關節上(shang)0.5cm處摘取(qu)腫脹(zhang)足(zu)爪，常規(gui)固定，脫水，包(bao)埋，切片，HE染色，用光鏡觀察。
2．4．2理化指標 采(cai)用酶聯(lian)免疫法測(ce)定其炎(yan)癥介(jie)質IL-1β、 PGE2水平，按照試(shi)劑(ji)盒說明書操作。
2．5統計方法
實(shi)驗(yan)數據以均數±標準差（±s）表示，統計(ji)學分(fen)析采(cai)用單因素方(fang)差分(fen)析及秩(zhi)和(he)檢驗(yan)。應用SPSS10.0統計(ji)軟件進行處理。
3結果
3．1芍藥甘草附子湯對大鼠細(xi)胞因子的影響
結(jie)果見表1~2。模(mo)型(xing)組(zu)與(yu)空白組(zu)比(bi)較(jiao)，IL-1β、PGE2明顯升高（P＜0.01）；而(er)芍(shao)藥(yao)甘草(cao)附子湯組(zu)和(he)雷公(gong)藤多甙組(zu)與(yu)模(mo)型(xing)組(zu)比(bi)較(jiao)，IL-1β、PGE2 明顯降低(di)（P＜0.01，P＜0.05）。
3．2光(guang)鏡下(xia)各(ge)組(zu)大鼠(shu)病(bing)(bing)變關節的(de)病(bing)(bing)理改變
A組：關節軟骨表層細胞較少(shao)，呈單個分布，深層細胞較大(da)且成行分布，多(duo)層滑(hua)膜細胞排列較為疏松。
B組：淋巴細(xi)(xi)胞(bao)、漿細(xi)(xi)胞(bao)及巨(ju)噬細(xi)(xi)胞(bao)明(ming)顯浸潤，滑(hua)膜(mo)細(xi)(xi)胞(bao)明(ming)顯增生(sheng)，并蔓延跨過軟(ruan)(ruan)骨(gu)表面(mian)，滑(hua)膜(mo)細(xi)(xi)胞(bao)增生(sheng)形(xing)成(cheng)的(de)成(cheng)纖(xian)維細(xi)(xi)胞(bao)、小血(xue)管和炎(yan)性細(xi)(xi)胞(bao)侵入形(xing)成(cheng)的(de)肉芽組織(血(xue)管翳(yi))導致軟(ruan)(ruan)骨(gu)表面(mian)糜爛、潰瘍，并有軟(ruan)(ruan)骨(gu)細(xi)(xi)胞(bao)溶解死亡，軟(ruan)(ruan)骨(gu)和骨(gu)骺破(po)壞。
C組(zu)：軟(ruan)骨(gu)細(xi)胞(bao)、骨(gu)細(xi)胞(bao)形(xing)態正(zheng)常，滑膜細(xi)胞(bao)增生及炎(yan)性細(xi)胞(bao)浸潤較B組(zu)明顯減(jian)少。
D組：軟骨細胞、骨細胞形(xing)態正常(chang)，仍有(you)大(da)量滑膜細胞增生及炎性細胞浸(jin)潤。
4討論
4．1病因病機
我國遠(yuan)在公(gong)元前6世紀就有(you)了這方(fang)面的記載，如《左(zuo)傳?昭公(gong)元年(nian)傳》云：“風(feng)淫末疾”，就是(shi)指的一種(zhong)因受風(feng)而(er)(er)得的四肢(zhi)疾病。中(zhong)醫學雖無類風(feng)濕(shi)(shi)性關(guan)節炎(yan)的病名，但(dan)依據其臨床(chuang)癥狀，本(ben)病屬于中(zhong)醫學“痹(bi)癥”范疇，又可稱為(wei)“周痹(bi)”、“歷節”、“頑痹(bi)”、“骨痹(bi)”等。論痹(bi)首見(jian)于《內(nei)經(jing)》，《素問(wen)?痹(bi)論》“風(feng)寒(han)濕(shi)(shi)三氣(qi)(qi)(qi)雜(za)至，合而(er)(er)為(wei)痹(bi)”認為(wei)風(feng)寒(han)濕(shi)(shi)氣(qi)(qi)(qi)夾雜(za)侵襲人體，壅閉(bi)經(jing)絡，閉(bi)阻氣(qi)(qi)(qi)血是(shi)其病機。《普濟方(fang)?諸風(feng)門》曰：“體虛膚空，掩護不謹，以致(zhi)風(feng)寒(han)濕(shi)(shi)之邪偏歷關(guan)節”。主(zhu)要是(shi)由(you)于先天(tian)稟賦不足，身體素弱，腠理不固(gu)，掩護不當，以致(zhi)風(feng)寒(han)濕(shi)(shi)邪乘虛侵襲，流注經(jing)絡、關(guan)節、肌(ji)肉(rou)，致(zhi)氣(qi)(qi)(qi)血津液運行(xing)不暢(chang)而(er)(er)成。可見(jian)本(ben)虛標實是(shi)本(ben)病的病機特點。本(ben)虛為(wei)氣(qi)(qi)(qi)血、陰陽、臟腑虧損，標實為(wei)外(wai)受風(feng)寒(han)濕(shi)(shi)熱之邪。外(wai)邪內(nei)傷脾胃，運化功能失常，正(zheng)氣(qi)(qi)(qi)無力抗邪,邪氣(qi)(qi)(qi)羈留日(ri)久，蘊結不解，閉(bi)阻氣(qi)(qi)(qi)血經(jing)絡，耗(hao)津損液，化燥傷陰,由(you)輕至重,必漸耗(hao)傷肝(gan)腎，筋骨失養，最終致(zhi)畸致(zhi)殘。
4．2中醫藥治療
芍藥甘草附子湯由白芍、炙甘草、炮附子3藥組成，仲景原意用其治療汗后陰陽兩虛證。上已述及類風濕性關節炎（RA）的發病機制為先天稟賦不足，腠理不固，風寒濕邪乘虛侵襲，閉阻氣血經絡，最終耗損肝腎。方中白芍性微寒，味苦、酸；入肝、脾經，具有養血斂陰，柔肝止痛，平抑肝陽等作用，可“除血痹，通順血脈。”炙甘草健脾益氣補中，解百毒，緩急止痛，《神農本(ben)草(cao)經(jing)》曰其：“主(zhu)五藏(zang)六腑，寒(han)(han)熱邪(xie)氣(qi)。堅(jian)筋(jin)骨(gu)，長肌肉，倍力。”《日華子本(ben)草(cao)》：“通九(jiu)竅，利(li)百脈，益(yi)精養氣(qi)，壯(zhuang)筋(jin)骨(gu)”。二藥相(xiang)合酸甘化陰，滋陰養血，緩急止(zhi)痛(tong)(tong)。附(fu)子大辛大熱，可溫(wen)壯(zhuang)心腎(shen)之陽，且溫(wen)經(jing)散寒(han)(han)除濕(shi)止(zhi)痹(bi)痛(tong)(tong)，《神(shen)農本(ben)草(cao)經(jing)》：“主(zhu)風寒(han)(han)咳逆(ni)邪(xie)氣(qi)，溫(wen)中，金瘡破癥(zheng)堅(jian)積聚，血瘕，寒(han)(han)濕(shi)。痿躄，拘攣，膝痛(tong)(tong)，不能(neng)行步。”與(yu)(yu)甘草(cao)相(xiang)合辛甘化陽，且附(fu)子性猛，得甘草(cao)而緩，與(yu)(yu)白芍(shao)相(xiang)伍，一(yi)(yi)腎(shen)一(yi)(yi)肝，一(yi)(yi)剛一(yi)(yi)柔(rou)，一(yi)(yi)燥一(yi)(yi)潤(run)，一(yi)(yi)走一(yi)(yi)守，一(yi)(yi)氣(qi)一(yi)(yi)血，肝腎(shen)并補(bu)，陰陽互調，既(ji)可溫(wen)陽補(bu)腎(shen)，又(you)可養陰柔(rou)肝,除濕(shi)柔(rou)筋(jin)止(zhi)痛(tong)(tong)。RA病(bing)至后(hou)期，多表現為肝、腎(shen)、脾三(san)臟不足，此與(yu)(yu)芍(shao)藥甘草(cao)附(fu)子湯的功效主(zhu)治(zhi)(zhi)基(ji)本(ben)相(xiang)符(fu)，故(gu)本(ben)方能(neng)治(zhi)(zhi)該病(bing)。
4．3實驗指標
大鼠佐劑性(xing)關節炎屬于變態反(fan)應(ying)性(xing)免疫炎癥反(fan)應(ying)：（1）IL-1β是關節軟(ruan)骨(gu)(gu)(gu)破(po)壞(huai)的(de)(de)(de)(de)(de)最重要的(de)(de)(de)(de)(de)炎癥介質。IL-1β可刺激(ji)(ji)急性(xing)期蛋(dan)白(bai)，凝血酶(mei)原(yuan)激(ji)(ji)活物等(deng)產生，刺激(ji)(ji)T細胞(bao)(bao)(bao)活化，刺激(ji)(ji)膠(jiao)原(yuan)酶(mei)合成(cheng)；IL-1β刺激(ji)(ji)成(cheng)骨(gu)(gu)(gu)細胞(bao)(bao)(bao)分(fen)泌粒細胞(bao)(bao)(bao)-巨噬細胞(bao)(bao)(bao)集落刺激(ji)(ji)因子，反(fan)過來使破(po)骨(gu)(gu)(gu)細胞(bao)(bao)(bao)產生增加，導(dao)致(zhi)骨(gu)(gu)(gu)質疏(shu)松；IL-1β可抑制軟(ruan)骨(gu)(gu)(gu)蛋(dan)白(bai)多(duo)糖(tang)的(de)(de)(de)(de)(de)合成(cheng)，使軟(ruan)骨(gu)(gu)(gu)降(jiang)解。（2）PGE2：PGE2主要由成(cheng)骨(gu)(gu)(gu)細胞(bao)(bao)(bao)合成(cheng)，通過特異(yi)性(xing)受體的(de)(de)(de)(de)(de)介導(dao)完成(cheng)對骨(gu)(gu)(gu)組織(zhi)代謝的(de)(de)(de)(de)(de)調節。高濃度的(de)(de)(de)(de)(de)PGE2可刺激(ji)(ji)軟(ruan)骨(gu)(gu)(gu)細胞(bao)(bao)(bao)及破(po)骨(gu)(gu)(gu)細胞(bao)(bao)(bao)減少蛋(dan)白(bai)多(duo)糖(tang)的(de)(de)(de)(de)(de)合成(cheng)、加速其降(jiang)解，并可促進滑膜纖維母細胞(bao)(bao)(bao)及軟(ruan)骨(gu)(gu)(gu)細胞(bao)(bao)(bao)產生釋放蛋(dan)白(bai)水解酶(mei)、膠(jiao)原(yuan)酶(mei)，釋放骨(gu)(gu)(gu)鈣(gai)，導(dao)致(zhi)軟(ruan)骨(gu)(gu)(gu)基(ji)質崩(beng)解、軟(ruan)骨(gu)(gu)(gu)吸收(shou)和(he)骨(gu)(gu)(gu)破(po)壞(huai)。
5結論
芍藥(yao)甘(gan)草附(fu)子(zi)湯(tang)能明(ming)顯地(di)降低AA大鼠血(xue)清中(zhong)IL-1β、PGE2含量(P＜0．05)，改善(shan)關(guan)(guan)節(jie)的病(bing)理(li)損害,據此認為芍藥(yao)甘(gan)草附(fu)子(zi)湯(tang)對治療(liao)類風濕(shi)性(xing)關(guan)(guan)節(jie)炎有(you)積極作(zuo)用。本方(fang)(fang)仲景本意為治汗后陰(yin)陽兩虛證，而對類風濕(shi)性(xing)關(guan)(guan)節(jie)炎亦有(you)較好療(liao)效，可見中(zhong)醫(yi)古方(fang)(fang)絕非(fei)專(zhuan)方(fang)(fang)專(zhuan)病(bing)，只要辨證相同，可廣范(fan)用于(yu)多(duo)系(xi)統疾病(bing)。
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